Клеточная культуральная среда серии Transpro

БЕССЫВОРОТОЧНАЯ СРЕДА ДЛЯ ТРАНЗИЕНТНОЙ ТРАНСФЕКЦИИ HEK293/CHO

Системы транзиентной экспрессии являются довольно полезной стратегией исследования элементов, регулирующих экспрессию генов, или когда результаты эксперимента необходимо получить в короткое время. Данная система предлагает удобный способ сравнения разных векторов, а также подтверждения того, что выбранная плазмида экспрессии является функциональной плазмидой, перед ее использованием для установления стабильной системы экспрессии. В недавнее время было подтверждено, что данный подход позволяет осуществлять крупномасштабное производство рекомбинантных белков и препаратов на основе вирусов, в том числе аденоассоциированного вируса и лентивируса.

Некоторые реактивы для доставки генов работают только в бессывороточных средах, тогда как другие нечувствительны к присутствию сыворотки, что, дополнительно, может значительно повышать экспрессию рекомбинантных продуктов. Присутствие побочных продуктов клеточного метаболизма в подготовленной среде ассоциировалось с низким показателем трансфекции. Поэтому часто перед трансфекцией требуется полностью сменить среду. Однако данный этап не удовлетворяет потребностям в надежном крупномасштабном процессе временного трансфицирования. Кроме того, в процессе производства секретируемых белков сыворотка может создавать серьезные препятствия на последующих этапах очистки. Множество проблем также связано с присутствием сыворотки в культурах, где происходит возможная контаминация инфекционными микроорганизмами или белками сыворотки, а также с высокими затратами и межсерийной вариабельностью. Разработка бессывороточных сред для систем временной трансфекции является одной из стратегий решения данной проблемы и обладает тем преимуществом, что способна обеспечивать снижение нагрузки, связанной с очисткой рекомбинантного продукта.

Клеточная Линия HEK293 широко используется при производстве рекомбинантных белков ввиду множества ее преимуществ, в том числе высокой эффективности трансфекции с помощью большинства векторов для доставки генов, быстрой адаптивности к суспензионной культуре и бессывороточным средам. Кроме того, для эффективной трансфекции клеток в суспензионных культуральных системах могут применяться недорогие реактивы, такие как полиэтиленимин или кальция фосфат. Клетки HEK293 используются для продукции вирусов, исследований клеточных циклов, экспрессии генов, метаболизма и других исследований.

СЕРИЯ TRANSPRO

Transpro CD01

Transpro CD01 — это универсальная клеточная культуральная среда для транзиентной трансфекции. Она может применяться для систем посевных ферментеров, культивирования клеток высокой плотности и культивирования с транзиентной трансфекцией как клеток HEK293, так и клеток CHO, причем замены сред путем центрифугирования во время транзиентной трансфекции не требуется.

Transpro CD01 может использоваться с клетками HEK293, в том числе HEK293, Expi293, 293F, и клетками CHO, в том числе expiCHO, CHOS, для экспрессии антител, рекомбинантных белков и вирусов методом транзиентной трансфекции во время разработки.

Преимущество

Transpro feed 1

Transpro feed 1 — это универсальная подпиточная среда для транзиентной трансфекции, которая используется в сочетании со средой Transpro CD01. Она может использоваться для транзиентной трансфекции как клеток HEK293, так и клеток CHO.

Transpro feed1 может использоваться с клетками HEK293, в том числе HEK293, Expi293, 293F, и клетками 293E CHO для экспрессии антител, рекомбинантных белков и вирусов методом транзиентной трансфекции во время разработки.

Преимущества

Тематическое Исследование

Серийный пассаж

При инокуляции с плотностью 0,5×10⁶ клеток/мл, 1X пассаж каждые 2 дня, после 10X серийных пассажей плотность жизнеспособных клеток Expi293 может достигать стабильности при ~2,5×10⁶клеток/мл, а 293F — при ~2,0×10⁶ клеток/мл, причем жизнеспособность обеих составляет > 98 %，морфология клеток представляет правильный круг, а время удвоения — нормальное.

При инокуляции с плотностью 0,3×10⁶ клеток/мл, 1X пассаж каждые 2 дня, после 10X серийных пассажей плотность жизнеспособных клеток ExpiCHO может достигать стабильности при ~2,8×10⁶клеток/мл, причем жизнеспособность их составляет > 98 %，морфология клеток представляет правильный круг, а время удвоения — нормальное.

Периодическое культивирование

При культивировании с плотностью 0,5×10⁶ клеток/мл в течение 7 дней с подпиткой глюкозой пиковая плотность жизнеспособных клеток достигается при ~16×10⁶ клеток/мл для Expi293, ~9×10⁶ клеток/мл для 293F и ~20×10⁶ клеток/мл для ExpiCHO соответственно.

Транзиентная трансфекция с GFP